Mio pmn Manuale Utente Scaricare il pdf (Pagina 29)

CHPLC-Qualität" zur Anwendung. Als feste Phase diente eine mit 3 µm ODS-Hypersil gepackte

Säule (Länge 25 cm, Innendurchmesser 4,6 mm). Diese wurde zunächst konditioniert mit Aqua

Tridestillata (1 h) und 1 mM EDTA Na

in Methanol:Wasser (10:90) (2 h). Anschließend erfolgte

die Äquilibration des Systems mit HPLC-Phase.

Nach Aufspritzen der Proben erfolgte die Messung bei 270 nm Wellenlänge für Leuko-

triene (15 Minuten), anschließend bei 237 nm für HETEs und HEPEs. Die Flow-Rate betrug 1

ml/h. Zusätzlich wurden die Eicosanoide mit einem Photodioden Array identifiziert, der die

Messung des vollen UV-Spektrums erlaubte (190-340 nm). Eine Koelution mit eventuellen

Verunreinigungen konnte auf diese Weise ausgeschlossen werden.

Reagentien

Lösung A

Lösung B

Mobile Phase

Aqua Tridest.

5,0

83,0

38,0

Methanol

95,0

8,0

Isopropanol

9,0

Ameisensäure

0,002

1,7

0,001

Triethylamin

6,3

Acetonitril

54,0

4,5

5,0

4,38

Tabelle 1: Zusammensetzung der Lösungen für die Reversed Phase HPLC.

Angaben in Volumenprozent.

Zur Ermittlung der Recovery der einzelnen Eicosanoide mit dem verwendeten

HPLC-System wurden authentische Standards in unterschiedlichen Konzentrationen aufgespritzt.

Die Ergebnisse zeigt Tabelle 2.

1 2 ... 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 ... 72 73

Nessun commento

Mio pmn Manuale Utente Pagina 29