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in der Küvette gut durchmischt. Nach 60 Sekunden Inkubationszeit im Photometer wurde anhand

von 20 Messungen der Extinktionszunahme über 3 Minuten die Enzymkinetik bestimmt.

2.2.6. Analytik der Lipoxygenaseprodukte

Die quantitative Erfassung der Lipoxygenaseprodukte erfolgte mittels High-Performance

Liquid Chromatography. Die entsprechende Methodik wurde etabliert von Kiss et al. (

2.2.6.1. Festphasenextraktion

Die Festphasenextraktion erfolgte mit Chromabond C18ec-Vorsäulen (100 mg ODS, 1

ml Probenvolumen), die auf einer Vakuumkammer installiert wurden. Die Vorsäulen wurden

zunächst konditioniert mit Lösung A (s. Tabelle 1). Nach zweimaligem Waschen der Säulen mit

Aqua Tridestillata erfolgte die Äquilibration mit Lösung B. Die Proben wurden in 1 ml der

HPLC-Phase aufgenommen und die vorbereiteten Vorsäulen damit beschickt. Es folgten

Reinigungsschritte mit Lösung B (4x 1 ml) und Spülung mit Aqua Tridestillata (3x 1 ml), um

eventuelle Verunreinigungen in den Proben zu beseitigen. Anschließend wurden die Eicosanoide

mit 1 ml der Lösung A eluiert. Das Eluat wurde in Spitzbodenvials aufgefangen, zum Trocknen

mit Stickstoff abgeblasen und bei -20°C gelagert. Zum Aufspritzen wurden die Proben in 50 µl

HPLC-Phase aufgenommen, davon wurden 20 µl aufgespritzt.

2.2.6.2. Reversed-Phase HPLC

Als mobile Phase wurde eine Acetonitril-Methanol-Wasser-Lösung verwendet (s. Tabelle

1), die vor der Verwendung durch eine Teflonmembran filtriert und im Ultraschallbad entgast

wurde. Bei der Herstellung der mobilen Phase kamen ausschließlich Reagenzien in

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